Una specifica infezione da tubercolosi è presente da molti anni nei tessuti e nelle strutture umane e in determinate circostanze si diffonde rapidamente in tutto il corpo in 2-3 mesi. A volte il miglior trattamento è molto difficile da scegliere a causa della diagnosi tardiva e dell'adattamento del patogeno a molti farmaci.
L'ultima diagnosi di PCR della tubercolosi aiuta a rilevare non solo la malattia sviluppata, ma anche il patogeno stesso, quando i primi segni della malattia non sono ancora apparsi.
Cos'è la PCR?
La diagnosi di tubercolosi mediante PCR è apparsa di recente. Nel 1983, un microbiologo americano, Cary Mullis, inventò una procedura mediante la quale i microrganismi potevano essere ricostruiti da materiale biologico in un breve segmento. Questo lavoro ha guadagnato il premio Nobel.
La PCR per la tubercolosi è un processo a catena polimerica in cui la diagnosi e la rilevazione di agenti patogeni virali mediante ingegneria genetica. La tecnica è utilizzata in laboratori immunologici, microbiologici, virologici e biochimici.
Il metodo universale aiuta i medici a diagnosticare e identificare un processo infettivo anche dopo le prime ore di infezione, molto prima della comparsa dei sintomi. La ricerca è possibile anche con una piccola quantità di biomateriale.
Cosa è necessario per l'analisi?
- Diversi segmenti di DNA (primer), con cui inizia la sintesi biologica;
- Composti nucleotidici, la base della molecola di DNA o RNA;
- Un enzima polimerasi che accelera l'analisi della PCR.
Qual è la base del metodo?
In primo luogo, un segmento di DNA viene estratto da un biomateriale da una persona infetta, utilizzando i metodi di biosintesi del gene-molecolare, il tipo di microrganismi a cui appartiene il biofragment è ulteriormente determinato.
Questa complessa reazione richiede meno tempo di alcuni biometodi. La PCR determina l'agente patogeno in poche ore, mentre non è necessario isolarlo da un fluido biologico (espettorato, sostanza cerebrospinale o sangue), non è necessario farlo crescere a lungo su un mezzo nutritivo. È sufficiente che il materiale studiato contenga un filamento di DNA di un agente patogeno infettivo.
Quando si esegue un esame del sangue PCR per tubercolosi in vitro, la sintesi degli acidi ribonucleici del micobatterio tubercolosi viene creata artificialmente.
Fasi della diagnosi
La reazione molecolare mediante PCR è una procedura semplice che richiede poco tempo. Il biomateriale richiesto è preso: sangue, espettorato, liquido di lavaggio bronchiale sono usati per determinare il tbc.
- In primo luogo, la forma primaria del DNA viene distrutta, 2 catene vengono separate ad alta temperatura (massimo 98 ° C per non più di 2 minuti);
- Quindi viene eseguita la ricottura, la temperatura primaria viene ridotta di diverse divisioni, il filamento di DNA è collegato al primer;
- Lo stadio successivo è chiamato allungamento, con la biosintesi delle strutture molecolari necessarie.
Per ottenere il numero richiesto di copie del DNA, da 25 a 30 tali cicli devono passare e il numero risultante di micobatteri è facilmente riconoscibile.
È necessario eseguire la PCR per la tubercolosi?
Direttamente a tutti i pazienti con TVC sospetta, la diagnostica a catena non viene eseguita, poiché la procedura richiede l'uso di costose apparecchiature. Non tutte le istituzioni dello stato medico ne consentono l'acquisto, soprattutto perché i metodi usuali di diagnosi del tubercolosi del micobatterio sono anch'essi informativi.
- Presa in carico accurata della storia, interrogando il paziente;
- Esame esterno;
- Test della tubercolina di Mantoux;
- Esame radiografico o fluorografico;
- Se necessario, diagnostica del computer;
- Esame microscopico o batteriologico della maschera con espettorato.
La PCR per tubercolosi viene eseguita solo quando non è possibile eseguire un'altra analisi strumentale o in circostanze difficili da diagnosticare.
Nonostante sia stato inventato un gran numero di metodi diagnostici, il numero di pazienti con tubercolosi continua a crescere. Inoltre, l'incidenza ha acquisito alcune caratteristiche: una forma grave della malattia è spesso osservata, il numero di morti aumenta, l'agente patogeno diventa resistente ai farmaci chemioterapici esistenti.
Molte persone non vogliono sottoporsi a un controllo di routine ogni anno, rifiutano la vaccinazione, il che porta ad un aumento dell'incidenza. Tali circostanze richiedono metodi di ricerca efficaci e informativi disponibili per adulti e bambini con diagnosi di TBC. La PCR ha vantaggi rispetto ad altri metodi diagnostici.
Qual è il valore del metodo?
Questa ultima ricerca si è dimostrata efficace. Se per una serie di ragioni è difficile fare una diagnosi o, in alcuni casi controversi, la PCR rileva il bacillo del tubercolo più facilmente nel materiale biologico rispetto ad altri metodi.
- Questo rapido studio, un piccolo segmento della molecola rende possibile effettuare una diagnosi accurata in poco tempo in circa 5 ore, questo viene utilizzato in casi di emergenza, ad esempio, prima di un intervento chirurgico urgente;
- Un esame del sangue per la tubercolosi è possibile quando altri metodi non sono disponibili o controindicati - a volte per il rilevamento del patogeno tbc, devono essere presi molti colpi di Rg, la dose di radiazioni è troppo grande;
- Usando la reazione della polimerasi, qualsiasi liquido biologico può essere esaminato per la presenza di micobatteri. Ad esempio, è possibile condurre uno studio sul fluido cerebrospinale con meningite tubercolare o urina con tubercolosi urogenitale;
- Il metodo è sicuro, la diagnosi di tubercolosi nei bambini che usano la PCR non causa difficoltà;
- Il metodo della reazione polimerica rivela un bacillo tubercolare in qualsiasi forma e stadio della malattia;
- La presenza di pochi batteri nel biomateriale consente di vedere la presenza di microrganismi, poiché si tratta di una reazione sensibile;
- PCR facilmente diagnostica la ricorrenza della malattia.
Nonostante l'enorme numero di vantaggi, tutti i pazienti con sospetto di studio tbc non sono fatti, poiché ci sono anche degli svantaggi, sono anche presi in considerazione.
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Video - diagnosi precoce
Quali sono gli svantaggi?
Questo metodo di diagnosi è piuttosto eccezionale che naturale, per questo ci sono delle ragioni. Prima di tutto, viene preso in considerazione l'alto costo del metodo. L'attrezzatura è costosa, le cliniche pubbliche non hanno la possibilità di acquistarlo a causa del prezzo elevato, ma la maggior parte dei laboratori pagati ha l'attrezzatura, vengono analizzati.
- Il metodo rileva i batteri morti che sono morti dopo il trattamento, mentre la PCR mostra un risultato positivo. Immediatamente dopo la chemioterapia, non ha senso condurre uno studio, poiché il risultato sarà inaffidabile;
- Le mutazioni del Mycobacterium tuberculosis sono suscettibili, il che porta all'inefficienza del metodo e il filamento del DNA non può essere sintetizzato in modo coerente.
L'ambiente per lo studio deve essere attentamente selezionato, sangue o urina possono essere raccolti solo se vi è il sospetto di infezione. L'espettorato non dovrebbe essere preso per l'esame se si sospetta tubercolosi ossea. In questa situazione, la diagnosi sarà errata.
Il sangue e l'urina di un paziente con tubercolosi da studiare su PCR sono raramente presi, l'identificazione della malattia in questo modo è discutibile. In questi media biologici, l'agente patogeno è determinato solo in sepsi o nel caso di tubercolosi disseminata. Le forme locali sono più comuni, con il loro sangue e le urine possono rimanere invariati. Il più spesso, la flemma è presa per esame.
Chi mostra l'analisi?
La maggior parte dei pazienti viene inviata per la diagnosi di PCR in casi controversi e difficili di tubercolosi. Quando i professionisti medici inviano referenze per la ricerca?
- Se c'è un contatto con una persona che è stata diagnosticata in modo affidabile con la tubercolosi, ma è difficile da diagnosticare con metodi convenzionali;
- In tali circostanze, se il paziente per fornire la clinica è impossibile per la radiografia o altre ricerche. In una situazione del genere, è più semplice ispezionarlo con il metodo del polimero. L'analisi dell'espettorato viene semplicemente consegnata al laboratorio in un apposito contenitore e il risultato diventa noto dopo poche ore;
- Prima dell'operazione, è urgente determinare se il paziente è malato di tubercolosi, nel qual caso è indicata la PCR;
- A causa della sicurezza del metodo, è possibile condurre un'indagine su una donna incinta o un bambino, senza creare un ulteriore carico radiografico;
- Risultati dei test Mantoux dubbiosi.
Chiunque lo desideri può essere esaminato a pagamento se la tubercolosi non è stata confermata con l'aiuto della batteriologia e della fluoroscopia. Ciò accade se la lesione nel tessuto polmonare è invisibile nell'immagine Rg in una proiezione diretta e il paziente non è in grado di raccogliere correttamente l'espettorato, ma i segni della tubercolosi umana sono disturbati.
La moderna reazione PCR per la diagnosi è la chiave del successo del trattamento, a seguito della quale la prevalenza della malattia diminuisce. I metodi tradizionali di identificazione dei disturbi non sempre producono l'effetto desiderato.
L'analisi della PCR fino ad oggi è diventata uno dei metodi di diagnosi affidabili e sicuri nelle prime fasi della malattia.
Analisi PCR per tubercolosi
L'analisi PCR per la tubercolosi è la più popolare tra le ricerche mediche nel campo di questa malattia.
Ma come avvertire te stesso e i tuoi cari da questa terribile malattia? Come passare i test necessari per la PCR?
I sintomi della tubercolosi e la sua prevenzione
Gli esperti dicono che circa il 30% della popolazione totale soffre di tubercolosi.
La percentuale più alta della malattia si sviluppa in paesi non sviluppati. Questo si verifica più spesso a causa della ridotta immunità negli esseri umani.
La malattia è una delle più antiche. Questa malattia può essere trovata nel rivestimento del cervello, nel tratto digestivo, nelle articolazioni e nella colonna vertebrale, nel sistema urinario e in piccole aree della pelle umana.
Gli esperti determinano più facilmente la pelle colpita. Sul sito ci sono piccoli sigilli, che con il passare del tempo aumentano di dimensioni, esplodono con liquido biancastro.
L'agente eziologico della tubercolosi può essere spesso rilevato quando si parla con una persona malata, quando tossisce o starnutisce. Di solito, la malattia procede senza sintomi o ha una forma aperta, ma la diagnosi PCR della tubercolosi rende possibile rilevarlo nelle prime fasi e nei casi di emergenza.
Sintomi della malattia: tosse secca prolungata, febbre, brividi, sudorazione eccessiva durante la notte, forte perdita di peso, sensazione di stanchezza e debolezza.
La forma aperta della malattia è la più pericolosa. Una persona che soffre di tubercolosi è in grado di infettare le persone sane.
Il sintomo più importante della malattia polmonare è l'emottisi. Si verifica in qualsiasi forma della malattia.
In alcune situazioni, questo può portare a sanguinamento dai polmoni di una persona. È molto pericoloso e richiede un intervento medico urgente.
Per la prevenzione e il riconoscimento della tubercolosi, gli esperti prescrivono: un campione - un test della tubercolina, un esame di materiale biologico, fluorografia, raggi X e un esame del sangue, espettorato o saliva.
Diagnosi della malattia
Diagnosi migliorata della malattia - questo è corretto e durante il trattamento iniziato. Nella maggior parte dei casi, i soliti metodi di rilevamento degli agenti patogeni non hanno sempre un effetto e sono già superati.
Il modo più importante per identificare e diagnosticare la malattia polmonare sono i test di visita medica. Di solito utilizzare la diagnostica PCR. Questo sondaggio è stato scoperto abbastanza recentemente, nel 1983, dal biochimico americano Mullis.
Il test in un paziente con tubercolosi polmonare viene eseguito esclusivamente in casi particolari quando è difficile stabilire la diagnosi o è impossibile rilevare la malattia in modo strumentale.
La reazione a catena della polimerasi è un metodo PCR affidabile. Questa analisi consente di determinare l'agente eziologico di quanto è nel sangue, nell'urina e nei fluidi del midollo spinale. Tale esame medico è il più sicuro.
L'analisi PCR dà un risultato del 100%.
Ha un'alta sensibilità, che aiuta a riconoscere la malattia per la prima volta dopo l'infezione, prima che compaiano i sintomi della malattia. Questo metodo di analisi dà il risultato entro poche ore dalla consegna del materiale biologico. La semina di questa analisi viene eseguita tre volte, ma l'aspirazione dello stomaco malato viene eseguita solo in ospedale.
Sono stati sviluppati tre criteri per determinare i risultati: alta precisione, sensibilità fino al 90%, specificità.
Il test per la PCR viene utilizzato in alcuni casi:
- diagnosticare la tubercolosi polmonare;
- determinare la fonte della malattia;
- definizione di localizzazione extrapolmonare;
- diagnosi di recidiva.
Valutare il risultato e prescrivere il trattamento medico corretto, può solo uno specialista. È molto importante assegnare lo schema corretto di trattamento medico per il rilevamento della tubercolosi, è necessario condurre un test per la suscettibilità del patogeno ai dispositivi anti-tubercolari.
Una varietà di test medici per la tubercolosi
È possibile effettuare l'analisi necessaria in due modi: prendere sangue o saliva da una persona o fare espettorato.
Gli esami del sangue mediante PCR possono essere di due tipi: ELISA e PCR. Tale studio aiuta a monitorare l'efficacia delle cure mediche.
Un ELISA aiuta a trovare anticorpi nel corpo umano che resistono ai microbi della tubercolosi. Questo studio viene effettuato una volta al giorno. Il principale svantaggio è la bassa sensibilità, che consente di determinare solo una malattia con un basso livello di infezione.
La ricerca più popolare ed efficace è l'analisi sulla tubercolosi del micobatterio. Con lei, i medici possono facilmente trovare il DNA dei batteri nel sangue umano. Questo metodo viene anche utilizzato per determinare il numero di batteri, per controllare il trattamento del paziente, per rilevare la recidiva precoce.
La saliva PCR è uno dei metodi di ricerca più avanzati. Tale analisi aiuterà a identificare i batteri infettivi nella saliva. L'uso della PCR aumenta il numero di frammenti di DNA di microbi dannosi.
Il metodo di coltura è inteso per l'esame dell'espettorato umano, per la rilevazione dei microbatteri.
Preparazione per il test della PCR
Attenzione, è necessaria la corretta preparazione della saliva per la PCR. Se non vengono seguite tutte le prescrizioni, l'analisi potrebbe essere falsa positiva.
Prima di fare il test, è vietato fumare, assumere cibo e farmaci, oltre a consumare alcolici per 12 ore. È vietato lavarsi i denti, non è possibile utilizzare brillantante, deodorante per bocca e filo interdentale.
È vietato usare il rossetto e entrare in relazioni intime. Permesso di risciacquare la bocca con acqua bollita normale;
Questo esame aiuterà a identificare: herpes, clamidia, tubercolosi, patogeni di polmonite, oncovirus, barolleosi, mononucleosi, HIV, epatite di tutti i tipi, rosolia.
L'analisi per i micobatteri viene effettuata principalmente in casi controversi, vale a dire se è difficile fare una diagnosi o c'è stato contatto con un paziente affetto da tubercolosi, prima di iniziare l'operazione, per rilevare la malattia. Utilizzato per l'esame di una donna incinta, poiché questo metodo è il più sicuro per la madre e il feto.
A volte l'analisi viene eseguita in una clinica privata, dal momento che il paziente non ha rispettato le regole per il test, ma allo stesso tempo è preoccupato per tutti i sintomi. L'analisi può essere eseguita quando gli specialisti non sono sicuri dopo aver condotto un test di Mantoux o il paziente è un bambino.
Vantaggi e svantaggi dei test medici per la determinazione della tubercolosi
La PCR è il modo più popolare ed efficace per determinare la malattia.
La sua più grande differenza rispetto ad altri studi è un risultato rapido e accurato.
Il vantaggio di questa visita medica è che può essere eseguito per studi urologici, ginecologici, oncologici, infettivi, ematologici, polmonari, gastroenterologici e di altro tipo.
Il principale vantaggio di tale studio medico è che gli esami del sangue, l'espettorato e la saliva sono pronti in breve tempo (ci vorranno 5 ore per rilevare la malattia). Tale esame medico consente di condurre dei test quando determinati metodi di studio di una malattia sono proibiti o inaccessibili. Ottimo per rilevare la ricorrenza negli esseri umani.
Grazie a questa analisi, è diventato possibile condurre ricerche per qualsiasi ambiente biologico. È consentito prelevare materiale dai bambini. La PCR consente di identificare l'agente eziologico in qualsiasi stadio della malattia. A causa della sua alta sensibilità, i microbi possono essere trovati anche se sono presenti solo pochi batteri.
Il metodo PCR espande le sue capacità. Viene anche usato per determinare la paternità, per la produzione di nuovi geni, mutazioni, per incrociare elementi del DNA e così via.
Gli svantaggi di questo studio sono un metodo di indagine costoso.
Dopo un trattamento medico, un esame del sangue può mostrare la presenza di patogeni vivi o morti in piccole quantità, dopo una visita medica, darà un risultato positivo.
Batteri e microbi possono subire mutazione, dopo di che la PCR non sarà in grado di identificarli e identificarli, quindi solo uno specialista può prescrivere uno studio dell'ambiente richiesto, altrimenti tale esame medico sarà inefficace.
Dopo il test, c'è un risultato negativo, ma ciò non esclude la possibilità che una persona venga infettata dalla tubercolosi. Tale esame medico viene effettuato per i pazienti con grave malattia polmonare, quando altri studi non danno risultati accurati. La PCR sarà utile per le persone con tubercolosi polmonare ed extrapolmonare.
Sfortunatamente, le attrezzature mediche per individuare i patogeni della tubercolosi sono molto costose.
Gli ospedali e le cliniche pubbliche non possono permetterselo, ma le cliniche pagate eseguono i test dei pazienti e forniscono risultati precisi in breve tempo.
Diagnosi PCR della tubercolosi nei bambini e negli adulti
I moderni metodi diagnostici (pcr, diaskintest, quantiferon test) sono altamente efficaci, ma in pratica gli studi non sono stati verificati. La diagnosi di tubercolina è stata la base per identificare le persone infette e malate.
Il metodo ha permesso di identificare molti malati, ridurre le statistiche di morbilità, mortalità.
La semina di micobatteri e microscopia di espettorato secondo Zill-Nelson consente di diagnosticare in modo affidabile l'infezione. Il problema causa la presa esatta dell'espettorato direttamente dal bronco colpito. Sullo sfondo del processo tubercolare, una parte significativa dell'albero bronchiale è interessata. Dopo la semina batterica, è possibile condurre un test per la sensibilità dell'agente patogeno all'antibiotico.
Dopo aver analizzato il risultato della diagnosi da parte dei fitofarmaci, è diventato chiaro che la mancanza di escrezione dei bastoncini di Koch non significa l'assenza di infezione nel corpo. L'agente causale può essere determinato dopo il secondo, terzo, quarto prelievo di materiale.
I moderni metodi diagnostici (dst, Quantiferon test) rilevano i micobatteri con un decorso attivo della malattia. In presenza di micobatteri all'interno dei linfonodi, con forme extrapolmonari della malattia, i test sono più spesso negativi.
La diagnosi tempestiva è la base per prevenire complicazioni gravi e conseguenze pericolose della malattia.
Metodi moderni
La sostituzione della diagnosi classica di tubercolina è diaskintest (dst). Secondo le ultime normative, lo studio dovrebbe sostituire il test standard di Mantoux, che ha permesso di identificare molti casi di morbilità e infezione tra la popolazione.
L'essenza di Diaskintest, così come la diagnosi di tubercolina, coinvolge la somministrazione sottocutanea di proteine di patogeni della tubercolosi. In risposta all'iniezione, una reazione di ipersensibilità si sviluppa con cambiamenti cutanei specifici: arrossamento, indurimento, formazione di vesciche.
Un risultato positivo di Diaskintest è tipico per i pazienti con un decorso attivo della malattia. In caso di infezione o di maggiore allergizzazione, lo studio sarà negativo. L'effetto negativo di dst può essere il risultato di una forte immunità, ma quando una persona è infetta.
Paragonato a Mantu, Diaskintest è un modo più versatile e sensibile per diagnosticare la tubercolosi. L'assenza di rilevamento di infezioni richiede il suo uso simultaneamente alla diagnosi di tubercolina.
Nonostante i risultati delle sperimentazioni cliniche, gli scienziati sostengono l'universalità generale e la sensibilità del metodo, lo studio non può essere considerato una soluzione diagnostica universale.
Un test è stato sviluppato da accademici dell'Istituto di ricerca di Sechenov. L'assenza di allergie durante l'uso di diaskintest è spiegata dalla somministrazione sottocutanea di proteine della tubercolosi specie-specifiche. Dopo che la loro introduzione è determinata dalla reazione cutanea sotto forma di rossore, sigilli.
Qual è il test quantiferon
Il test quantificante viene valutato dopo aver preso il sangue del paziente. Il meccanismo della procedura è determinare l'interferone gamma, che viene rilasciato dai linfociti T dopo l'incontro con la tubercolosi dei micobatteri. I test determinano le proteine tubercolari che contengono non solo batteri umani e bovini. Il test del quantiferon può anche essere usato per diagnosticare la micobatteriosi causata da altri micobatteri che formano cambiamenti specifici sulla radiografia. Il risultato del test viene determinato in diverse provette, il che aumenta la sensibilità diagnostica del metodo.
PCR per la diagnosi della tubercolosi infantile
La reazione a catena della polimerasi è un metodo accurato ma costoso per diagnosticare la tubercolosi. La PCR viene eseguita dopo la broncoscopia.
È razionale condurre una reazione a catena della polimerasi dopo aver ricevuto risultati negativi. I risultati vengono valutati dopo la coltura dell'espettorato tre volte di Mycobacterium tuberculosis. Nelle condizioni più favorevoli, l'identificazione dell'agente patogeno indica l'infezione. Lo scopo della chemioprofilassi evita il processo tubercolare attivo in presenza di bastoncini Koch.
Al ricevimento di un ceppo di un microrganismo, è possibile seminare sulla suscettibilità agli antibiotici. Determinazione degli antibiotici che possono uccidere i microrganismi, ci permette di valutare quali farmaci trattare l'infezione.
La PCR nei bambini viene effettuata con risultati negativi della semina, ma se c'è un giro del test della tubercolina, visualizzazione dei segni di infezione ai raggi X, rilevamento dei sintomi clinici dell'infezione in atto.
La reazione a catena della polimerasi fornisce un'elevata precisione (circa il 99%). Il metodo è basato sull'amplificazione dell'acido nucleico. Micobatteri, virus e altri microrganismi hanno sequenze nucleotidiche uniche. La loro diagnosi consente di identificare l'agente eziologico della malattia.
La sensibilità della PCR nei bambini è meno bassa che negli adulti. In pratica, sono state rivelate le seguenti caratteristiche della reazione a catena della polimerasi in un bambino:
- Specificità: 80-100%;
- Sensibilità: 25-80%.
Nonostante l'alta precisione del metodo, ottenere un risultato negativo non significa l'assenza di tubercolosi nei bambini. Un uso più razionale del metodo nei pazienti con stati di immunodeficienza. Nella diagnosi di infezione da tubercolosi extrapolmonare.
Gli errori di interpretazione sono determinati da violazioni nella raccolta e preparazione del materiale per lo studio.
Le ragioni del risultato negativo della PCR nella diagnosi di tubercolosi
La diffusione di micobatteri nel corpo da parte di linfogene (attraverso i vasi linfatici) ed ematogena (attraverso il flusso sanguigno) assicura la colonizzazione di molti tessuti, la comparsa di focolai extrapolmonari di infezione.
Quando la determinazione a raggi X dei fuochi di distruzione (distruzione) nei polmoni non è necessario per la PCR. Negli adulti, usando la radiografia, è possibile identificare forme avanzate con un alto grado di sicurezza.
Nei bambini, lo studio PCR viene utilizzato più spesso a causa della localizzazione latente di micobatteri all'interno dei linfonodi, che porta a risultati negativi quando si utilizzano altri metodi diagnostici. Con la coltura batterica, è sufficiente rilevare circa 10 microrganismi. Va tenuto presente che non tutti sono responsabili della tubercolosi polmonare attiva.
Per la corretta diagnosi di PCR, seeding batterico, DST i requisiti devono essere seguiti:
- Conservare il materiale in provette sterili;
- Elimina l'ingresso di altri batteri;
- Durante il trasporto, osservare l'igiene personale per evitare che il biomateriale cada sul corpo, sul viso e sulle vie respiratorie.
Sangue conservato insieme al conservante EDTA. Ci sono caratteristiche uniche della preparazione del materiale per ogni analisi di laboratorio, con cui gli esperti hanno familiarità.
Metodi diagnostici innovativi
La diagnosi precoce dell'infezione consente una chemioprofilassi tempestiva, per prevenire gravi malattie.
La cancellazione della clinica durante l'infanzia, i risultati insufficienti del test, l'interpretazione analfabeta della valutazione dei campioni non consentono una verifica tempestiva dell'infezione. Per prevenire la morbilità infantile, è necessaria un'attenta analisi dei risultati, con la possibilità di stabilire una diagnosi in una fase precoce.
Metodo moderno di diagnosi di laboratorio di tubercolosi nei bambini - rilevamento di TAB-TM
La reazione alla determinazione del marcatore delle cellule T nei bambini denominata "TAB-TM" è caratterizzata da un'elevata sensibilità. L'essenza del metodo consiste nell'identificazione di un particolare gruppo di differenziazione (CD-27) localizzato sulla superficie dei linfociti T. Dopo aver isolato questo fattore, le citochine sono colorate con citometria.
Il metodo è stato descritto in letteratura dal 2014. I risultati delle osservazioni indicano un'alta sensibilità del metodo. La determinazione di TAB-TM è un metodo espresso per la diagnosi della tubercolosi mediante esame dell'espettorato.
Un esame del sangue per la tubercolosi - che mostra
Nella fase iniziale, l'infezione da tubercolosi si verifica senza sintomi clinici specifici. La diagnosi di laboratorio nei bambini diventa possibile quando la bacchetta di Koch si moltiplica.
Quali cellule vengono valutate nel processo tubercolare in un'analisi del sangue di laboratorio:
- I globuli rossi sono globuli rossi che sono responsabili del trasporto di ossigeno ai tessuti. Con un leggero decorso della tubercolosi polmonare dal lato del germoglio rosso del sangue, non ci sono cambiamenti patologici. La presenza di una concentrazione distruttiva contribuisce a sanguinare con l'anemia del sangue. La condizione si sviluppa con infiammazione tubercolare della parete intestinale. Il numero di reticolociti sullo sfondo della patologia aumenta oltre l'1%;
- I leucociti aumentano con qualsiasi infezione. Leucocitosi è accompagnata da uno spostamento del leucogramma a sinistra. L'aumento del numero di neutrofili segmentati può essere rintracciato nella fase iniziale. Nella tubercolosi grave con fusione purulenta, stati di immunodeficienza, si osserva una leucopenia (diminuzione del numero dei leucociti del sangue). Allo stesso tempo aumenta il contenuto di linfociti (oltre il 20%);
- L'eosinofilia può essere ricondotta allo stadio iniziale. La condizione si verifica quando infiltrati tubercolari di vari organi. La grave tubercolosi con decadimento negli adulti porta alla completa assenza di eosinofili;
- Miglioramento del basofilo.
I test di laboratorio per la tubercolosi non sono specifici né per i bambini né per gli adulti. Tali cambiamenti sono caratteristici di molte infezioni batteriche o virali.
Gli indicatori dell'emogramma offrono interesse agli specialisti della TBC per determinare lo stadio dell'infezione da tubercolosi.
Con l'infiltrazione attiva, la leucocitosi può essere rintracciata a causa di un aumento del numero di neutrofili. La grana patologica appare nelle cellule, che indica l'intossicazione del sangue.
I centri di disintegrazione portano a una diminuzione del numero di eosinofili, neutrofili, forme giovani, linfociti. Quando si verifica la disseminazione, si verifica una monocitosi assoluta. Sullo sfondo del riassorbimento, aumenta il numero di linfociti ed eosinofili.
Al consolidamento dei centri l'emogramma non è caratterizzato da cambiamenti.
Prove infantili per la tubercolosi: diagnosi di tubercolina
Per molto tempo, i phthisiatrici hanno messo in scena la reazione di Mantoux. Tali test per la tubercolosi hanno permesso di rilevare non solo l'infezione attiva, ma anche l'infezione. L'essenza del campione era l'iniezione sottocutanea di tubercolina, una sostanza che causava l'allergizzazione del corpo. L'impasto utilizzato materiale ottenuto da Micobacterium Bovis. Dopo un'iniezione sottocutanea, si ottiene una papula, che riflette la risposta del corpo alla penetrazione dei micobatteri:
- Papula normale - dimensioni da 5 a 16 mm;
- In assenza di una reazione - indebolimento del sistema immunitario, assenza di micobatteri;
- Papule grande - la presenza di antigeni batterici, in contatto con un vettore di bacilli tubercolari.
Il metodo non è considerato affidabile a causa dell'elevato numero di reazioni false positive. Quando i risultati discutibili richiedevano conferma PCR. Con l'avvento di diaskintest (dst), la situazione è cambiata. L'uso combinato di metodi consente di ottenere risultati più affidabili.
Classici metodi "fisiologici" per la diagnosi della tubercolosi
I fitofarmaci per la diagnosi di tubercolosi nei bambini e negli adulti usano i seguenti test:
- Studio della storia del paziente (contatto con il paziente o il portatore del bacillo tubercolare). Identificare i fattori di rischio sociali aiuta a suggerire possibili infezioni;
- Valutazione della sensibilità alla tubercolina (test di Mantoux) con tubercolina PPD alla dose di 5-10 TE. La valutazione del risultato viene effettuata in 48-72 ore;
- L'esame radiologico viene effettuato in bambini e adulti con tubercolosi sospetta, una curva di test alla tubercolina;
- La coltura batteriologica è una prova inconfutabile dell'infezione causata da Mycobacterium tuberculosis. Con una corretta raccolta dell'espettorato, il rilevamento del patogeno nei lavaggi dello stomaco, i test per la tubercolosi possono essere considerati positivi. La bacchetta di Koch si trova in ascessi purulenti, linfonodi, versamento ascitico, essudato pleurico, urina, liquido cerebrospinale;
- La velocità di eritrosedimentazione aumenta con qualsiasi infezione, compresa la tubercolosi;
- La PCR consente di identificare un patogeno specifico, ma lo studio è costoso;
- Diaskintest determina la tubercolosi polmonare, ma spesso dà risultati negativi nella localizzazione extrapolmonare dell'infezione.
La moderna diagnostica della tubercolosi con l'uso di un complesso di metodi consente di determinare il micobatterio nel corpo con un alto grado di affidabilità. Utilizzando metodi esistenti, viene rilevato un processo attivo o un'infezione. Abbiamo solo bisogno di tempo per contattare gli esperti!
Diagnosi PCR della tubercolosi
La tubercolosi è un'infezione specifica, la sua attenzione può essere presente nei tessuti umani per anni e quindi diffondersi per diversi mesi. Questa è una malattia cronica i cui regimi terapeutici ottimali sono difficili da selezionare. Uno dei motivi di ciò è la diagnosi tardiva, quando i micobatteri, mentre nel corpo umano, si sono già adattati a molti farmaci.
Quali sono i moderni metodi di diagnosi? Diagnostica PCR - che cos'è? Come viene condotta questa ricerca? In quali casi viene diagnosticata la tubercolosi con questo metodo e qual è la sua essenza?
Che cos'è la diagnostica PCR
Questo è uno dei metodi più moderni per diagnosticare non solo le malattie, ma anche il rilevamento di materiale biologico. La diagnostica della PCR è stata inventata relativamente di recente. Circa 30 anni fa, nel 1983, un biochimico americano, Carey Banks Mullis, propose un complesso schema di recupero per il materiale biologico di microrganismi in un segmento breve. Grazie alla sua scoperta, lo scienziato ha ricevuto il premio più alto - il premio Nobel.
Che cos'è - diagnosi di PCR delle infezioni? La reazione a catena della polimerasi (PCR) è una diagnosi del rilevamento di malattie virali, basata su metodi di ingegneria genetica. È ampiamente usato in microbiologia medica, immunologia e virologia. Il metodo è universale e aiuta a fare una diagnosi con una piccola quantità di materiale. Un'infezione può essere rilevata letteralmente nelle prime ore di infezione, molto prima che compaiano i primi sintomi della malattia.
Il metodo consiste nell'ottenere dal materiale di una persona malata non il patogeno stesso, ma frammenti del genoma (particelle di DNA), la sua biosintesi con successiva determinazione a quale classe di microrganismi il materiale genetico ottenuto appartiene mediante metodi genetici molecolari.
Nonostante il fatto che si tratti di un processo complesso, ci vuole molto meno tempo rispetto a molti metodi biologici per rilevare agenti infettivi. Entro poche ore, un microrganismo può essere rilevato mediante PCR. Per fare questo, non è necessario isolarlo dall'ambiente (sangue, liquido cerebrospinale, espettorato) e farlo crescere a lungo sui terreni di coltura artificiale. È sufficiente che un piccolo frammento del filamento di DNA dell'agente infettivo sia presente nel materiale in esame.
La base della reazione è la possibilità in condizioni artificiali (in vitro) di creare la sintesi di molecole di acido nucleico dell'agente infettivo.
Cosa è necessario per la PCR?
- I primer sono i segmenti di DNA da cui inizia la biosintesi o la creazione.
- Nucleotidi o composti complessi che sono alla base di una molecola di DNA o RNA.
- La reazione a catena della polimerasi è impossibile senza la presenza di polimerasi, che è un enzima che accelera la PCR.
Le fasi della diagnostica PCR
Come viene condotta la diagnosi molecolare mediante PCR? La procedura è semplice e richiede poco tempo, tenendo conto della raccolta di materiale.
- Prima di iniziare lo studio, prendono il materiale biologico necessario - questo è l'acqua di lavaggio bronchiale, il sangue, il contenuto gastrico, l'espettorato. Il tipo di materiale biologico dipende dal presunto agente patogeno.
- Denaturazione o distruzione della struttura primaria del DNA, che consiste in due catene. L'essenza di questo stadio è di separare i due circuiti sotto l'influenza della temperatura elevata (il massimo è 98 ºC, che non dura più di due minuti).
- Nella fase successiva della PCR, chiamata ricottura, la temperatura viene ridotta di diversi gradi in modo che il primer si leghi al filamento del DNA.
- Allungamento, durante il quale la sintesi delle molecole desiderate avviene direttamente.
Di conseguenza, solo 25-30 di questi cicli ricevono il numero necessario di copie del DNA del microrganismo, che sono facilmente riconoscibili.
La PCR richiede la diagnosi di tubercolosi?
Non è possibile che tutte le persone con sospetta tubercolosi eseguano la PCR, poiché il metodo richiede attrezzature costose. Non tutte le cliniche pubbliche possono permettersi di comprarlo. Inoltre, è successo che anche i soliti metodi di diagnosi di un'infezione nella maggior parte dei casi si giustificano da soli.
Questi includono:
- indagine paziente, presa della storia;
- esame completo della persona;
- uno studio che utilizza il test alla tubercolina di Mantoux;
- radiografia o fluorografia;
- diagnostica del computer, se necessario;
- metodi di ricerca microbiologica: microscopia a striscio ed esame batteriologico dell'espettorato.
La PCR per tubercolosi viene eseguita in casi particolari quando è difficile fare una diagnosi o non è possibile eseguire altri metodi strumentali.
Nonostante l'abbondanza di metodi diagnostici, l'incidenza della tubercolosi continua a crescere. Attualmente, non c'è solo la sua crescita, ma anche altre caratteristiche:
- la malattia si presenta spesso in forma grave;
- il numero di casi fatali aumenta;
- sempre più resistenti alla moderna chemioterapia sono forme diagnosticate della malattia.
La riluttanza delle persone stesse a sottoporsi annualmente ad esami medici di routine, il rifiuto della vaccinazione porta alla diffusione della tubercolosi. In tali condizioni, abbiamo bisogno di metodi di ricerca rapidi, informativi ed efficaci che dovrebbero essere accessibili a bambini e adulti. Tutti i metodi diagnostici sopra riportati sono molto inferiori alla PCR.
Benefici della diagnosi di tubercolosi con PCR
Questa ricerca, anche se nuova, si è dimostrata efficace, specialmente in casi controversi in cui è impossibile fare una diagnosi per una serie di motivi.
Grazie alla PCR, è molto più facile rilevare l'agente eziologico della tubercolosi nel materiale di prova.
I vantaggi della diagnostica PCR sono i seguenti.
- Questa è una rapida analisi. Un piccolo frammento della molecola del DNA può essere utilizzato per diagnosticare in poche ore (circa cinque), che viene utilizzato con successo in situazioni di emergenza quando, ad esempio, prima di un'operazione è necessario determinare se una persona è malata di tubercolosi.
- L'analisi PCR è consentita nel caso in cui altri metodi non siano disponibili o vietati (per la rilevazione della tubercolosi polmonare, a volte è necessario prendere diverse immagini radiografiche, che saranno una grande dose di radiazioni).
- Con l'aiuto della PCR, qualsiasi ambiente biologico viene esaminato per la presenza di un agente patogeno in esso. Ad esempio, è possibile condurre uno studio sul liquido cerebrospinale, se vi è il sospetto di meningite tubercolare.
- Diagnosi PCR consentita di malattie infettive nei bambini, perché il metodo è sicuro.
- Ti consente di identificare l'agente patogeno in qualsiasi fase della malattia.
- L'elevata sensibilità della PCR consente di rilevare il Mycobacterium tuberculosis, anche se nel materiale biologico sono presenti solo pochi microrganismi.
- È bene effettuare per la diagnosi di recidiva della malattia.
Dopo tutto la PCR letta sembra un metodo diagnostico quasi perfetto, che dovrebbe rendere tutti sospettati di tubercolosi. Ma ci sono anche degli svantaggi qui, devono essere presi in considerazione.
Svantaggi della PCR nella diagnosi di tubercolosi
Nel nostro tempo, tale diagnostica è più rara della regolarità. E per questo c'è una ragione.
- Questo è un metodo di ricerca costoso. In molte cliniche, l'attrezzatura per la PCR è assente a causa del suo alto costo, ma l'analisi può essere ancora eseguita in laboratori pagati.
- Immediatamente dopo il trattamento, nel corpo umano possono ancora essere presenti micobatteri morti o che vivono in piccole quantità (il risultato sarà positivo durante la diagnostica PCR), quindi il metodo sarà inaffidabile in questo momento, non ha senso eseguirlo.
- Le mutazioni dei micobatteri si traducono in PCR inefficace - una normale sequenza di filamenti di DNA non può essere sintetizzata.
- È necessario scegliere l'ambiente giusto per lo studio, il sangue viene prelevato solo se si sospetta di essere infetto (sepsi), non è necessario prendere l'espettorato se c'è una questione di tubercolosi degli organi del sistema nervoso. In questo caso, la PCR non sarà in grado di rilevare l'agente patogeno e la diagnosi sarà poco informativa.
Indicazioni per la rilevazione della tubercolosi mediante analisi PCR
La diagnosi di PCR della tubercolosi viene eseguita più spesso in casi controversi. Quando i medici riferiscono questo studio?
- Se è difficile fare una diagnosi usando i soliti metodi disponibili, ma c'è stato un contatto con un paziente affetto da tubercolosi.
- Nel caso in cui una persona non possa essere consegnata a una clinica per sottoporsi a test di routine per la tubercolosi, è più facile esaminarla utilizzando la PCR, poiché l'espettorato per il test può essere consegnato in un barattolo e la diagnosi viene confermata entro poche ore.
- Se una persona sta per avere un'operazione di emergenza ed è urgente scoprire se è malato di tubercolosi.
- Se necessario, una donna incinta è anche meglio esaminare la tubercolosi mediante PCR, poiché il metodo è sicuro.
- Su base retribuita, chiunque non sia stato diagnosticato la tubercolosi è stato confermato utilizzando metodi batteriologici e fluoroscopia. Questo accade quando la lesione nei polmoni è impercettibile nell'immagine diretta e la persona durante l'espettorato per lo studio non può seguire le raccomandazioni per la corretta raccolta del materiale. In questo caso, la persona è preoccupata per tutti i sintomi caratteristici della tubercolosi polmonare.
- Quando ci sono dubbi sui risultati del test di Mantoux.
- È preferibile fare diagnosi di PCR della tubercolosi nei bambini. La procedura è sicura, non crea ulteriore esposizione alle radiazioni ed è efficace nel rilevare forme difficili da diagnosticare della malattia.
La diagnosi tempestiva della tubercolosi è la chiave per un trattamento adeguatamente prescritto e per ridurre la diffusione della malattia. Spesso, i metodi familiari di rilevamento della malattia non sono sempre efficaci. Pertanto, la PCR oggi è uno dei metodi più affidabili e sicuri per rilevare l'infezione nelle prime fasi del suo sviluppo.
Analisi PCR (diagnosi) della tubercolosi
Tubercolosi o consumo - una delle malattie infettive più popolari del XXI secolo. I suoi agenti patogeni sono microbatteri speciali - bastoncini di Koch.
La malattia si diffonde non solo ai polmoni, ma anche al cervello, alla digestione, alle articolazioni o alla colonna vertebrale, al sistema urinario e alla pelle.
Secondo l'OMS, ogni anno 10 milioni di persone soffrono di tubercolosi, di cui 3 milioni sono fatali.
La situazione è particolarmente triste sul territorio dei paesi della CSI, qui si verificano periodicamente epidemie tubercolari. Russia, Kazakistan, Ucraina sono guidate da una triste valutazione sulla diffusione di questa infezione.
L'infezione è facilmente trasmessa da goccioline trasportate dall'aria o attraverso il sistema digestivo, colpisce gli organi vitali ed è anche in grado di adattarsi rapidamente ai farmaci polimerici e alla chemioterapia.
Uno dei principali fattori per il successo del trattamento della tubercolosi è il rilevamento tempestivo dell'infezione.
Metodi diagnostici
L'umanità ha inventato molti metodi per riconoscere una malattia pericolosa. La diagnosi di tubercolosi è divisa in strumentale e di laboratorio.
Nel primo caso, un esame del sangue per la tubercolosi, così come l'espettorato, l'urina.
Il secondo gruppo è uno studio che utilizza raggi X ed endoscopia. I metodi strumentali per diagnosticare la tubercolosi, a loro volta, sono radiologici e chirurgici.
Tipi di metodi di radiazione per trovare la malattia
- La fluorografia è un metodo per diagnosticare una malattia familiare a tutti i residenti della CSI. Utilizzando i raggi X, vengono esaminati i polmoni e i linfonodi ilari.
- Radiografia del torace - simile alla fluorografia, ma un metodo migliore per rilevare l'infezione. L'immagine è ottenuta in maggior dettaglio e in due proiezioni, ma questa procedura è circa sei volte più costosa. Di solito è usato dopo che seri sospetti della malattia sono sorti.
- La tomografia computerizzata viene eseguita come ulteriore diagnosi, utilizzata anche dopo una buona ragione per la presenza di infezione.
I metodi chirurgici di diagnosi comprendono l'endoscopia bronchiale, la mediastinoscopia e la toracocoscopia.
Il primo metodo è quello di studiare l'albero bronchiale dei polmoni con l'aiuto di una "sonda" in questo organo. I restanti due metodi consentono di studiare la parte pleurica del polmone con la puntura del torace.
Tutti e tre i metodi sono un intervento chirurgico serio e vengono utilizzati più spesso nel processo di progressione della malattia.
I test di laboratorio includono:
- Analisi dell'espettorato per il bacillo tubercolare.
- Esame al microscopio
- Diagnosi PCR della tubercolosi
Cos'è la diagnosi PCR?
Uno dei metodi più avanzati di diagnosi di laboratorio di specialisti di infezioni chiama la reazione a catena della polimerasi.
Questo metodo è stato sviluppato dal famoso scienziato americano Carrie Mullis nel 1983, per il quale ha vinto il premio Nobel.
L'analisi PCR è l'isolamento delle particelle di DNA da espettorato, sangue, liquido cerebrospinale, feci, ecc. per la loro successiva biosintesi.
Con l'aiuto di un complesso studio genetico molecolare, viene determinata la natura dei microbi nel corpo del paziente.
Questo tipo di analisi per la tubercolosi si svolge in più fasi:
- Innanzitutto vengono presi campioni biologici. I materiali sono collocati in contenitori speciali e inviati al laboratorio.
- Nel centro di ricerca, le analisi sono riscaldate a 97 gradi. Questo rende possibile distruggere la struttura del genoma del DNA dei microrganismi, che consiste in diverse catene.
- La temperatura viene specificamente abbassata in modo che i primer (i partecipanti al DNA da cui inizia il processo di biosintesi) possano connettersi a qualsiasi catena di acido desossiribonucleico.
- Successivamente, viene eseguita la biosintesi delle molecole necessarie per il rilevamento.
Dopo 25-30 cicli ripetuti nel processo di ricerca di laboratorio, i medici hanno l'opportunità di riconoscere se microrganismi infettivi sono presenti nel corpo del paziente o meno.
Vantaggi e svantaggi
La PCR per la tubercolosi è la tecnica diagnostica più moderna. Il metodo consente di rilevare l'infezione in qualsiasi momento con elevata affidabilità. vantaggi:
- Velocità: lo studio richiede non più di cinque ore. I risultati del test per i microbi della tubercolosi possono essere trovati entro 24 ore.
- Sicurezza: il metodo PCR non ha controindicazioni di età.
- Tempestività - questa tecnica consente di rilevare la tubercolosi in quelle fasi in cui la malattia non ha sintomi.
- Alto grado di precisione - se ci sono solo pochi microrganismi nelle analisi, saranno trovati usando una reazione a catena della polimerasi. Inoltre, questa tecnica consente di identificare facilmente l'agente eziologico della tubercolosi.
- Versatilità: la diagnostica viene utilizzata non solo per rilevare il consumo, ma anche per altre malattie come la clamidia, la gonorrea, ecc.
Nonostante i numerosi vantaggi, l'uso di questa tecnica nella pratica medica domestica è l'eccezione piuttosto che la regola. Ci sono una serie di ragioni per questo.
Gli svantaggi di questo metodo sono:
- L'alto costo del sondaggio.
- Il metodo non è adatto a coloro che hanno subito una terapia, dal momento che la presenza di batteri Koch morti può portare a risultati falsi positivi.
- Nel caso di mutazione di microrganismi infettivi, il loro genoma non può essere riconosciuto facendo una falsa conclusione.
- È importante scegliere il giusto ambiente di rilevamento. Ad esempio, il risultato di un esame del sangue per PCR per tubercolosi (ingresso di diluizione) sarà negativo se il sistema nervoso è infetto.
- Non è sempre possibile applicare questo metodo a pazienti con diagnosi di lesioni polmonari.
Inoltre, tale analisi per la tubercolosi richiede attrezzature moderne che il 90% degli ospedali non possiede. Nella CSI, tale analisi può essere effettuata dalla rete di cliniche Invitro.
Termini di analisi
Le raccomandazioni per i pazienti sottoposti a tale test per la tubercolosi variano a seconda del tipo di analisi che passano.
Quando si preleva il sangue per la PCR, è necessario astenersi dal fumare un'ora prima della procedura, per due ore, per escludere alcol e cibi grassi.
Si raccomanda anche di astenersi dallo sforzo fisico, è anche impossibile prendere il sangue per la tubercolosi a stomaco vuoto.
Quando si preleva un tampone dalla bocca e dalla cavità nasale, non si può mangiare 2-4 ore prima della procedura, altrimenti non sarà informativo. Inoltre, non bere alcolici.
Per analisi accurate delle letture è vietato fumare prima di un'ora prima della procedura. Alla vigilia, astenersi dal lavarsi i denti e usare spray e spray per la bocca.
Se sospetti tubercolosi del sistema urogenitale, il paziente per 2-3 giorni prima del parto dovrebbe escludere il sesso, per 2-3 ore prima della procedura, non andare in bagno "in piccolo". Gli organi genitali dovrebbero essere lavati con acqua naturale senza mezzi speciali.
Le donne sono avvisate di non usare compresse vaginali, candele, palle e anche di astenersi dal test nei giorni critici.
5 giorni prima della consegna, il risultato è necessario abbandonare la procedura di colposcopia, così come l'ecografia transvaginale,
Quando viene utilizzata la diagnostica PCR?
Non tutte le cliniche hanno una diagnosi così complessa, ma i medici ricorrono sempre più a tali metodi di ricerca. Di solito questo tipo di analisi viene eseguito in situazioni speciali.
- In caso di risultati dubbi di manta, può essere utilizzato un esame del sangue per la tubercolosi.
- Nei casi in cui il paziente è stato in contatto con una persona infetta, ma il medico curante non può determinare con precisione la diagnosi.
- In caso di chirurgia d'urgenza, quando è necessario scoprire in breve tempo se il paziente ha questa infezione.
- Quando una paziente è incinta, quando altri metodi di ricerca non sono abbastanza sicuri per un neonato.
Va notato che questa diagnosi è raccomandata per i bambini a causa della sua sicurezza.
Se uno studente ha controindicazioni contro un test alla tubercolina, può sottoporsi a un esame del sangue per tubercolosi invece che mantenerlo mediante PCR.
Qual è l'analisi PCR per la tubercolosi
Un metodo innovativo per la rilevazione di microrganismi, inventato dallo scienziato Cary Mullis alla fine del secolo scorso - analisi PCR. Ha ricevuto per i suoi scritti il premio Nobel. Completamente questo processo è chiamato reazione a catena della polimerasi. Consiste nel ripristino del tipo di microrganismo nel biomateriale fornito utilizzando brevi frammenti di DNA. Ciò consente di rilevare l'infezione in una fase precoce e iniziare immediatamente il trattamento, senza causare gravi sintomi e complicanze.
Qual è l'analisi
La diagnosi mediante PCR consiste nell'ottenere segmenti di DNA patogeno da materiale biologico e allinearli nella catena corretta. Ciò consente l'identificazione del microrganismo a cui appartengono le cellule.
La procedura viene eseguita in tre fasi:
- Raccolta di materiale biologico
- Identificazione e allineamento del DNA.
- Riconoscimento dell'infezione.
Questo studio richiede attrezzature mediche speciali - amplificative. È dotato di una fotocamera, in cui il materiale studiato interagisce con gli enzimi chimici e ad alta temperatura. All'uscita, il tecnico di laboratorio ha una lunga catena di DNA dell'agente causale, se ce n'è una nel corpo umano.
Come prepararsi per la diagnosi
L'analisi PCR è un complesso processo di ingegneria genetica che richiede accuratezza e serietà sia da parte dei tecnici di laboratorio che dei pazienti. Un ruolo importante nella correttezza dei risultati dell'analisi è svolto dalla preparazione per la procedura, ovvero dalla corretta raccolta di materiale.
Le principali fonti di informazione sulla malattia sono:
Altre opzioni possono essere utilizzate, i liquidi, se necessario, vengono presi per l'analisi da diversi organi.
Per il paziente, ci sono alcune regole che devono essere seguite prima della procedura. Se è presente un esame del sangue, è vietato per 8 ore prima della raccolta:
- mangiare cibo;
- fumare;
- bere bevande alcoliche;
- prendere farmaci dentro
La sera, prima di raccogliere l'espettorato, il farmaco viene bevuto per diluirlo e facilitare l'espettorazione. Al mattino, raccogliere il materiale dopo un'igiene accurata della cavità orale.
L'urina viene raccolta in un barattolo sterile al mattino a stomaco vuoto, dopo il lavaggio, prima di prendere qualsiasi farmaco.
Se una persona assume antibiotici, l'analisi della reazione a catena della polimerasi deve essere posticipata, altrimenti il risultato della PCR non è affidabile. L'espettorato o il sangue devono essere donati due settimane dopo la fine del ciclo di trattamento.
Come funziona il processo di identificazione dei batteri
In breve, il processo consiste nell'isolare una porzione del DNA. L'uso di moderni metodi di ingegneria genetica ci consente di determinare il tipo di microrganismo. Inoltre, il materiale per l'analisi necessita di una piccola quantità.
Tecnicamente, questa è una procedura molto complicata, ma richiede meno tempo rispetto ai classici studi batteriologici. Gli agenti patogeni non devono essere isolati dal biomateriale, non è necessario coltivarli per diverse settimane. Il giorno della consegna, il paziente può già conoscere il risultato della sua analisi.
L'intero processo di PCR procede per fasi:
- Il lavoro è in corso con la forma primaria del DNA, che ad alta temperatura, vicino a 100 gradi, è divisa in due catene.
- La temperatura diminuisce, i fili sono collegati ai frammenti di acido nucleico - il primer.
- Si verifica l'allungamento - sintesi della struttura molecolare.
L'intera sessione consiste di circa trenta di tali procedure, ripetendo un ciclo come una reazione a catena. Questo è necessario per creare il numero di celle in cui i batteri risultanti diventano riconoscibili.
Conclusione dello studio
La descrizione del risultato della PCR (reazione a catena della polimerasi) fornisce un medico della tubercolosi, è semplice o dispiegata. Nel primo caso, la descrizione conterrà solo informazioni sulla presenza o l'assenza di bastoncini Koch. Se la decodifica è dettagliata, da essa puoi scoprire l'estensione della malattia, la sua attenzione. In base a questi criteri, è possibile determinare il trattamento più appropriato per la tubercolosi in ciascun caso.
L'analisi della polimerasi della reazione a catena non distingue tra agenti patogeni vivi e morti e parla solo della loro presenza. Pertanto, ha senso passare un secondo test per la tubercolosi solo 3-4 settimane dopo il passaggio della terapia prescritta dal medico.
Se il risultato è positivo, la scritta "Mycobacterium tuberculosis" viene messa a conclusione. Se c'è un risultato negativo, accanto al nome biologico dei batteri c'è un segno "non rilevato". Le analisi possono essere false positive. Questo accade raramente - in caso di violazione della tecnica di eseguire studi sulla PCR o in presenza di microrganismi non vitali. La conclusione finale sulla malattia può essere fatta solo da un medico della tubercolosi.
Vantaggi del metodo
La diagnostica PCR della tubercolosi ha guadagnato popolarità per molte ragioni. Ha molti vantaggi, tra cui:
- Accuratezza della ricerca Quando si analizza la tecnologia, è possibile identificare i batteri, anche se sono presenti in piccole quantità.
- Risultato rapido L'intero processo dalla raccolta del materiale alla conclusione finale richiede circa 5 ore. Rispetto alla semina, deve attendere fino a diverse settimane.
- Piena sicurezza per la persona, a differenza della fluorografia con la sua radiazione.
- Viene utilizzato qualsiasi biomateriale liquido. Per l'implementazione della PCR nella tubercolosi polmonare, l'espettorato fornisce le informazioni più accurate, mentre nella meningite tubercolare viene prelevato un campione dal midollo spinale. Un esame del sangue aiuta a identificare i focolai di infezione locali.
- Viene testata la sensibilità dei batteri agli antibiotici. Questo ti permette di prescrivere il trattamento corretto.
- Diagnosi precoce Puoi conoscere la presenza della malattia prima dell'apparizione dei suoi sintomi.
Oltre agli aspetti positivi, ci sono anche degli svantaggi. Il principale è il prezzo. L'analisi della PCR non è economica, che è associata all'uso di costose apparecchiature. Un altro svantaggio è la necessità di attendere il tempo per un nuovo test dopo un ciclo di trattamento per la tubercolosi. A volte il risultato del test è falso positivo. Questo accade a causa di una mutazione batterica.
Quando è necessaria la PCR
La PCR per la tubercolosi polmonare non ha controindicazioni ed è assolutamente sicura. Pertanto, ci sono alcune situazioni e malattie quando questa è l'unica possibilità di ricerca.
Questi includono:
- la gravidanza;
- contatto con un paziente tubercolare;
- difficoltà nel determinare la diagnosi di malattia polmonare;
- esame prima dell'intervento;
- reazione allergica;
- Infezione da HIV;
- giovane età.
È possibile utilizzare il metodo di PCR nella direzione che viene emessa in phthisiology, nonché un pediatra, un medico o un pneumologo.
Cosa può sostituire la diagnosi PCR della tubercolosi
Altri tipi di sondaggi non sono diventati obsoleti, ma continuano ad essere utilizzati. Sono utilizzati nei casi in cui non è possibile eseguire la PCR per la tubercolosi. Inoltre, il metodo moderno non è l'ideale, a volte i suoi indicatori sono messi in discussione e richiedono un nuovo controllo.
I seguenti metodi aiutano a determinare la presenza di tubercolosi in una persona:
- diagnosi di tubercolina (Mantoux);
- radiografia del torace;
- test di materiale biologico per la flora;
- radiografia dei polmoni.
Questi studi sono gratuiti e disponibili per tutti. Ma hanno i loro svantaggi:
- Il test della tubercolosi provoca allergie. Controindicato nelle malattie della pelle.
- Gli studi radiografici sono accompagnati da radiazioni, che non è applicabile ai bambini, alle persone con immunodeficienza e alle donne in gravidanza.
- Le analisi batteriologiche richiedono molto più tempo, il risultato può essere atteso fino a un mese.
Le alternative non sono una garanzia di una conclusione corretta al cento per cento. Sono più spesso utilizzati a scopo preventivo. La diagnosi di tubercolosi mediante PCR fornisce le informazioni più affidabili. Se possibile, è meglio usarlo.
Peculiarità della tubercolosi nei bambini e necessità di PCR
Il bambino dovrebbe essere particolarmente protetto dalla malattia - l'infezione da tubercolosi può causare gravi danni all'organismo con un'immunità non ancora pienamente formata.
Dopo aver inserito la bacchetta di Koch nell'organismo dei bambini, lo sviluppo della malattia passa attraverso le seguenti fasi:
- Latente. Dura fino a un anno, senza dare alcun sintomo.
- Intossicazione. Influisce sulla salute generale Appare debolezza, apatia, mancanza di appetito, sonnolenza e prestazioni ridotte. Temperatura costantemente leggermente elevata.
- La forma primaria della malattia. La tubercolosi è localizzata, formando il centro della malattia. Il bambino ha una tosse, mancanza di respiro, mal di testa, linfonodi ingrossati.
- Bronchoadenitis tubercolare. I sintomi sono dolore alle scapole, tosse con tono variabile del suono, respiro sibilante.
Di solito, la tubercolina viene iniettata per identificare l'infezione sotto la pelle di un bambino. Se questo tipo di esame è controindicato, la PCR per la tubercolosi è un'opzione indispensabile per la diagnosi. I bambini di solito fanno un esame del sangue, ma l'espettorato viene raccolto se necessario. Al minimo sospetto della presenza di tubercolosi, vengono condotti ulteriori studi per garantire un risultato positivo e iniziare immediatamente il trattamento in una fase precoce, prevenendo lo sviluppo della malattia.
I moderni metodi di ricerca sono sempre più veloci e affidabili. È un peccato che, a causa delle costose attrezzature per effettuare tali test, non ci sia una possibilità in tutte le istituzioni e località mediche. Il modo in cui condurre l'esame viene solitamente scelto dal medico, ma il paziente ha il diritto di scegliere. Se dovessi fare un test PCR, parlaci nei commenti. Se l'articolo ti è stato utile, condividilo nei social network - forse aiuterà i tuoi amici.